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适用专业：预防兽医学
适用年级：大学
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论文编号：197824
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硕士论文-热应激对体外小鼠早期囊胚发育能力及超微结构影响的研究，共65页，32274字
摘 要
以雌性昆明种小鼠为试验动物，经 PMSG-hCG 超数排卵后，收集受精卵，进行体
外培养。当胚胎发育至早期囊胚时，按照下列方式处理：（1）将体外培养至早期囊胚的
小鼠胚胎分别施以温和热应激（39℃，2h）和强烈热应激处理（41℃，2h），热应激结
束后在 37℃下继续培养；对照组在 37℃下连续培养。在体视显微镜下观察热应激后 24h
时早期囊胚发育到扩张囊胚的比率和热应激后 48h 时早期囊胚发育到孵化囊胚的比率；
利用早期胚胎总细胞计数法，统计热应激后 24h 时早期囊胚发育到扩张囊胚的平均总细
胞数及热应激后 48h 时早期囊胚发育到孵化囊胚的平均总细胞数。 2）将体外培养至早
期囊胚的小鼠胚胎分别施以温和热应激（39℃，2h）和强烈热应激（41℃，2h）处理，
分别在热应激后 0h 和 2h 时，收集胚胎，制作超薄切片；对照组胚胎处理方式同热应激
组。利用电子显微镜技术，观察不同强度热应激组和对照组胚胎及热应激后胚胎不经恢
复和恢复 2h 时的超微结构变化。试验结果如下：
1. 热应激对小鼠早期囊胚发育能力的影响
体外培养的小鼠早期囊胚在 41℃、6%CO2条件下热应激处理 2h，小鼠早期囊胚发
育到扩张囊胚（63.3±3.6%）和孵化囊胚（49.4±9.3%）的比率显著降低（P<0.05），而
在 39℃、5.5%CO2条件下热应激处理 2h的小鼠早期囊胚发育到扩张囊胚（80.8±6.4%）
和孵化囊胚（79.7±5.6%）的比率与对照组小鼠早期囊胚发育到扩张囊胚（81.7±6.5%）
和孵化囊胚（77.2±5.0%）的比率差异不显著（P>0.05）。与对照组小鼠早期囊胚发育到
扩张囊胚的平均总细胞数（57.11±1.7）相比，39℃热应激组（49.89±1.3）和 41℃热应
激组（42.22±2.0）小鼠早期囊胚发育到扩张囊胚的平均总细胞数均显著降低（P<0.05），
但 39℃热应激组（71.27±0.5）和 41℃热应激组（71.89±1.8）小鼠早期囊胚发育到孵化
囊胚的平均总细胞数与对照组（73.09±0.6）小鼠早期囊胚发育到孵化囊胚的平均总细胞
数之间差异不显著（P>0.05）。
2. 热应激对小鼠早期囊胚超微结构形态的影响
在 37℃正常培养的小鼠早期囊胚中，胞浆含有丰富的线粒体和内质网及少量的溶
酶体；粗面内质网上有大量的颗粒状的核糖体附着；细胞核内以常染色质为主，核仁大
而松散；细胞连接紧密、结构完整；卵周隙狭窄。
39℃热应激组小鼠早期囊胚的线粒体发生轻微肿胀，内质网略有扩张，部分核糖体
从粗面内质网上脱落；核周间隙稍有增大。经 37℃恢复培养 2h，上述异常细胞器已修
复。
41℃热应激组小鼠早期囊胚线粒体高度肿胀，粗面内质网上的核糖体脱落严重，滑
面内质网和溶酶体增多；卵周间隙和核周间隙明显增大；核仁的纤维部和颗粒部分离，
异染色质增多；桥粒连接结构被破坏，胞浆出现异常物质。热应激后经 37℃恢复培养
2h，损伤的细胞器没有得到修复。
以上结果说明，39℃温和热应激 2h 未对小鼠早期囊胚的发育能力和细胞器超微结
构形态产生明显的影响。41℃强烈热应激 2h 对小鼠早期囊胚发育具有明显的抑制作用，
并且损伤的胚胎难以从热应激中恢复。
关键词：热应激；小鼠；早期囊胚；发育能力；超微结构
目录
中文摘要 ......... 1
英文摘要 ......... 3
缩略符号 ....... Ⅰ
文献综述 ......... 1
1 前言 ............. 1
2 热应激对哺乳动物卵母细胞及早期胚胎发育能力的影响 ............... 1
2.1 热应激对卵母细胞成熟及受精过程的影响 1
2.2 热应激对附植前胚胎发育能力的影响 ........ 2
3 热应激抑制哺乳动物早期胚胎发育的作用机理 ............. 4
3.1 诱导氧化应激 ............ 4
3.2 促使细胞凋亡 ............ 4
3.3 阻碍有丝分裂 ............ 5
4 热休克蛋白 70 对细胞的保护作用 ................. 6
4.1 分子伴侣功能 ............ 7
4.2 诱导热耐受性 ............ 7
4.3 抑制细胞凋亡 ............ 7
4.4 抵抗氧化应激 ............ 8
4.5 参与细胞增殖 ............ 8
5 热应激对哺乳动物细胞器结构和功能的影响 ................. 8
5.1 热应激对细胞骨架的影响 .......... 9
5.2 热应激对线粒体的影响 .............. 9
5.3 热应激对细胞核的影响 ............ 10
5.4 热应激对核糖体、内质网、溶酶体及高尔基复合体的影响 ...... 10
试验一 热应激对小鼠早期囊胚发育能力的影响 ............. 12
1 试验材料 ... 12
1.1 试验动物 12
1.2 试验药品 12
1.3 试验器材 12
2 试验方法 ... 12
2.1 小鼠早期囊胚体外培养 ............ 13
2.2 胚胎细胞计数溶液配制 ............ 13
2.3 热应激处理 .............. 14
2.4 热应激后小鼠早期囊胚发育到扩张囊胚和孵化囊胚的比率 ...... 14
2.5 热应激后小鼠早期囊胚发育到扩张囊胚和孵化囊胚总细胞数 .. 14
2.6 数据统计 14
3 结果 ........... 14
3.1 热应激对小鼠早期囊胚发育到扩张囊胚和孵化囊胚比率的影响 ................ 14
3.2 热应激对小鼠早期囊胚发育到扩张囊胚和孵化囊胚总细胞数的影响 ........ 15
4 讨论 ........... 16
试验二 热应激对小鼠早期囊胚超微结构的影响 ............. 18
1 试验材料 ... 18
1.1 试验动物 18
1.2 试验药品 18
1.3 试验器材 18
2 试验方法 ... 18
2.1 小鼠早期囊胚体外培养 ............ 19
2.2 热应激处理 .............. 19
2.3 胚胎超薄切片药品配制 ............ 19
2.4 胚胎超薄切片制作 .. 20
2.5 图片处理 21
3 结果 ........... 21
3.1 热应激对小鼠早期囊胚线粒体的影响 ...... 21
3.2 热应激对小鼠早期囊胚溶酶体的影响 ...... 23
3.3 热应激对小鼠早期囊胚内质网的影响 ...... 25
3.4 热应激对小鼠早期囊胚细胞核的影响 ...... 26
3.5 热应激对小鼠早期囊胚细胞连接和卵周隙的影响 .... 28
3.6 热应激导致小鼠早期囊胚胞质产生异常物质 ............ 30
4 讨论 ........... 31
结论 ............... 34
参考文献 ....... 35
致谢 ............... 45
附录 ............... 46
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- 硕士论文-热应激对体外小鼠早期囊胚发育能力及超微结构影响的研究
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发表于 2011-8-22 18:25:30