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适用专业：动物遗传育种与繁殖
适用年级：大学
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论文编号：196720
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硕士论文-突变红褐色貉MC1R基因的单核苷酸多态性的检测
摘 要
红褐色貉是一种新的乌苏里貉变异毛色貉，其毛尖为红褐色、白底绒毛色，
且其眼睛和吻均为粉红色。经遗传分析初步确定这种新突变毛色为显性杂合基因
控制。本研究旨在通过红褐色貉的促黑素细胞激素受体（MC1R）基因检测来探
讨这种新突变毛色的遗传基础。
MC1R 称促黑素细胞激素受体，是一种由 317 个氨基酸构成的肽类物质，属
于 G-蛋白偶联受体，具有 7 次跨膜结构。该受体可与内源配体促黑激素或 Ag-
outi 蛋白相结合，在哺乳类动物黑色素细胞合成黑色素的过程中起到重要的调节
作用，对决定动物毛色具有重要意义。本研究根据根据狗 MC1R 基因的 DNA 序
列（GenBank 登录号：AF064455）设计引物，对红褐色貉和普通毛色的乌苏里
貉基因组 DNA 进行 PCR 扩增，得到目的片段，目的片段经纯化后克隆到 pUCm-T
载体，挑取 4 个阳性克隆进行序列测定。通过对红褐色貉与野生型貉的 MC1R
基因测序比较，检测到了两个变异位点：分别在 486bp 处编码第 53 位的亮氨酸
的第三密码子突变，由 G 突变为 C，属于同义突变；第 2 个突变位点在 785bp
处编码第 149 位的亮氨酸的第二密码子突变，由 A 突变为 T，属于错义突变，氨
基酸变为谷氨酸；可以把这两个突变位点作为与红褐色毛色性状有关基因紧密连
锁 SNP 标记，推测 MC1R 基因存在红褐色毛色性状相关的功能突变位点；在
MC1R 基因 486bp 处酶切后，结果显示：红褐色貉为 AB 基因型，野生型的乌苏
里貉为 BB 型；推测 A 等位基因可能参与控制毛色的红褐色表型， B 等位基因
可能参与控制野生型毛色（青灰色或青黄色）表型。
关键词：貉；黑色素；MC1R;SNP；突变
目录
摘 要..1
ABSTRACT ....2
符号和缩略词说明.3
引言....4
第一章文献综述.....5
1 貉的生物学特性.5
1.1 貉的品种...5
1.2 貉的体型外貌..5
1.3 貉的生态特征..5
1.4 貉的食性...5
2 貉的繁殖特点.....6
2.1 貉的性周期......6
2.2 貉的交配行为..6
2.3 貉的妊娠...6
2.4 貉的产仔...6
2.5 母仔行为...6
3 控制毛色的基因.7
3.1 Agouti 基因 ......7
3.2 TYR 基因 ..7
3.3 SILV 基因..7
3.4 MITF 基因 7
3.5 KIT 基因 ...7
3.6 MC1R 基因结构 .....8
3.6.1 N 端 ..8
3.6.2 细胞外环.8
3.6.3 细胞内环.8
3.6.4 MC1R 的四级结构 .....8
3.7 MC1R 基因的功能 .8
3.7.1 MC1R 对黑色素生成的调控机制—CAMP 信号通路是调节真黑色素形成的关键通路...9
3.7.2 MC1R 是 POMC 肽 Α-MSH 与 ACTH 对真黑色素生成影响所必需的 ...9
3.7.3 MC1R 是 AGOUTI 蛋白对黑色素生成所必需的 .10
4 MC1R 基因的分子生物学研究现状 ..10
4.1 鼠的 MC1R 基因 10
4.2 马的 MC1R 基因 10
4.3 牛的 MC1R 基因 11
4.4 绵羊的 MC1R 基因 .... 11
4.5 犬的 MC1R 基因 . 11
4.6 狐狸的 MC1R 基因 .... 11
4.7 人的 MC1R 基因 . 11
5 红褐色貉的发现及表型特征12
6 红褐色貉的核型分析.....13
7 单核苷酸多态性的研究进展14
7.1 单核苷酸多态性...14
7.2 基因组 SNPS 的发现及定位 ....15
7.2.1 直接测序......15
7.2.2 DNA 芯片法 16
7.2.3 基于生物信息学的 SNP 候选位点搜索 .....16
7.3 SNPS 的检测方法 .16
7.3.1 PCR-单链构象技术 ..16
7.3.2 限制性片段长度多态......16
7.3.3 突变错配扩增检验...17
7.3.4 动态等位基因特异性杂交.....17
7.3.5 分子信标技术....17
第二章 MC1R 基因单核苷酸多态性的检测 ......18
1 实验材料.....18
1.1 主要试剂..18
1.2 试剂的配置....18
1.2.1 提取 DNA 所用相关试剂 ......18
1.2.2 电泳所用试剂的配制19
1.3 主要仪器.19
2 试验方法....19
2.1 基因组 DNA 的提取及质量检测 .....19
2.1.1 基因组 DNA 的提取 19
2.1.2 DNA 质量的检测 ......20
2.1.2.1 0.8%琼脂糖凝胶电泳检测 DNA ......20
2.1.2.2 分光光度法检测 DNA ..20
2.2 引物的设计与合成......20
2.3 PCR 反应体系及反应条件.21
2.3.1 PCR 反应体系....21
2.3.2 PCR 反应条件....21
2.4 电泳..21
2.5 PCR 产物的回收...21
2.6 PCR 产物的克隆...22
2.6.1 PCR 产物克隆连接反应..22
2.6.2 大肠杆菌感受态细胞的制备.22
2.6.3 转化22
2.6.4 阳性克隆的筛选23
2.6.5 重组质粒的鉴定和提取..23
2.6.6 测序......23
2.7.7 PCR 产物酶切....23
3 结果......23
3.1 PCR 扩增结果23
3.2 两种貉 MC1R 基因的序列比较 ......24
3.3 貉与狗序列比对结果..24
3.4 PCR 扩增产物酶切图片.....25
4 讨论......25
4.1 MC1R 基因型同毛色相关性 ....25
4.2 突变位点对编码氨基酸的影响.26
结论..27
参考文献.28
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- 硕士论文-突变红褐色貉MC1R基因的单核苷酸多态性的检测
硕士论文-突变红褐色貉MC1R基因的单核苷酸多态性的检测.doc [983.00KB]
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发表于 2011-4-16 04:39:22
